วิธีโครมาโตกราฟีสำหรับการแยกสารประกอบ polyhydroxy คืออะไร?

เฮ้ เป็นซัพพลายเออร์ของสารประกอบ polyhydroxyฉันมีความรู้มากมายเกี่ยวกับสารที่น่าอัศจรรย์เหล่านี้และวิธีที่จะแยกพวกเขาออก สารประกอบ polyhydroxy ซึ่งมีกลุ่มไฮดรอกซิลหลายกลุ่ม (-OH) มีการใช้กันอย่างแพร่หลายในอุตสาหกรรมต่าง ๆ ตั้งแต่ยาไปจนถึงอาหารและเครื่องสำอาง ดังนั้นเรามาดำดิ่งลงไปในวิธีการโครมาโตกราฟีสำหรับการแยกสารเหล่านี้

โครมาโตกราฟีของเหลว (LC)

โครมาโตกราฟีของเหลวเป็นหนึ่งในเทคนิคที่ใช้กันมากที่สุดในการแยกสารประกอบ polyhydroxy มันทำงานได้โดยการผ่านเฟสมือถือของเหลวผ่านคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยเฟสคงที่ ส่วนประกอบที่แตกต่างกันในตัวอย่างมีปฏิสัมพันธ์แตกต่างกันกับเฟสคงที่ทำให้พวกเขามีความขยันในเวลาที่แตกต่างกัน

ย้อนกลับ - เฟสโครมาโตกราฟีของเหลว (RPLC)

RPLC เป็นที่นิยมอย่างมาก ในวิธีนี้เฟสคงที่ไม่ใช่ขั้วโลกซึ่งมักจะเป็นวัสดุที่ใช้ซิลิกาที่ยึดติดกับกลุ่มอัลคิลยาว - โซ่เช่น C18 เฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของน้ำและตัวทำละลายอินทรีย์เช่นเมทานอลหรือ acetonitrile สารประกอบ polyhydroxy เป็นขั้วเนื่องจากกลุ่มไฮดรอกซิลโต้ตอบกับเฟสเคลื่อนที่มากกว่าระยะนิ่ง ยิ่งขั้วมากเท่าไหร่ก็จะยิ่งเร็วขึ้นจากคอลัมน์

วิธีนี้ยอดเยี่ยมเพราะมันค่อนข้างง่ายในการตั้งค่าและสามารถแยกสารประกอบ polyhydroxy ที่หลากหลาย ตัวอย่างเช่นในการวิเคราะห์แอลกอฮอล์น้ำตาล (ชนิดของสารประกอบ polyhydroxy) RPLC สามารถแยกแอลกอฮอล์น้ำตาลที่แตกต่างกันได้อย่างมีประสิทธิภาพตามโครงสร้างโมเลกุลและขั้ว

ปกติ - เฟสโครมาโตกราฟีของเหลว (NPLC)

ในทางตรงกันข้ามกับ RPLC, NPLC ใช้เฟสที่อยู่กับที่ขั้วเช่นซิลิกาเจลและเฟสมือถือที่ไม่ใช่ขั้วโลกเช่นเฮกเซนที่มีตัวดัดแปลงขั้วโลกจำนวนเล็กน้อยเช่นไอโซโพรพานอล สารประกอบ polyhydroxy มีความสัมพันธ์ที่ดีขึ้นสำหรับเฟสคงที่ขั้ว การแยกจะขึ้นอยู่กับความแตกต่างในการทำงานร่วมกันของไฮโดรเจน - พันธะและไดโพล - ไดโพลปฏิสัมพันธ์ระหว่างสารประกอบและเฟสคงที่

NPLC มีประโยชน์เมื่อจัดการกับสารประกอบ polyhydroxy ที่ไม่ดี - คั่นด้วย RPLC ตัวอย่างเช่นสเตียรอยด์ polyhydroxy ที่ซับซ้อนบางตัวอาจแยกออกจากกันโดยใช้ NPLC เนื่องจากกลุ่มฟังก์ชันขั้วเฉพาะและเอฟเฟกต์ steric

แก๊สโครมาโตกราฟี (GC)

แก๊สโครมาโตกราฟีเป็นอีกหนึ่งเครื่องมือที่ทรงพลังสำหรับการแยกสารประกอบ polyhydroxy แม้ว่ามันจะต้องใช้ตัวอย่างบางอย่าง ใน GC ตัวอย่างจะถูกระเหยและดำเนินการผ่านคอลัมน์โดยก๊าซเฉื่อย (เฟสเคลื่อนที่) เฟสคงที่เป็นฟิล์มบาง ๆ ที่เคลือบบนผนังด้านในของคอลัมน์

Derivatization สำหรับ GC

เนื่องจากสารประกอบ polyhydroxy มีจุดเดือดสูงและความผันผวนต่ำจึงจำเป็นต้องได้รับการคัดเลือกเพื่อให้เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ GC วิธีการ derivatization ทั่วไป ได้แก่ silylation, acetylation และ methylation ตัวอย่างเช่น silylation เกี่ยวข้องกับการแทนที่อะตอมไฮดรอกซิลไฮโดรเจนด้วยกลุ่ม trimethylsilyl (TMS) สิ่งนี้ไม่เพียงเพิ่มความผันผวนของสารประกอบ polyhydroxy เท่านั้น แต่ยังช่วยเพิ่มความเสถียรทางความร้อนด้วย

เมื่อได้รับการแก้ไขแล้วสารประกอบ polyhydroxy สามารถแยกออกจากแรงดันไอและการโต้ตอบกับเฟสคงที่ GC สามารถให้การแยกความละเอียดสูงและมักใช้ในการวิเคราะห์สารประกอบ polyhydroxy โมเลกุลขนาดเล็กเช่นน้ำตาลง่าย ๆ

ไอออน - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี (IEC)

ไอออน - Exchange Chromatography ขึ้นอยู่กับการแลกเปลี่ยนไอออนระหว่างตัวอย่างและเฟสคงที่ เฟสที่อยู่กับที่มีกลุ่มการทำงานที่มีประจุไม่ว่าจะเป็นกลุ่มไอออนบวก - กลุ่มแลกเปลี่ยน (เรียกเก็บเงินเชิงลบ) หรือกลุ่มไอออน - กลุ่มแลกเปลี่ยน (เรียกเก็บเงินบวก)

ไอออนบวก - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี

สำหรับสารประกอบ polyhydroxy ที่สามารถสร้างไพเพอร์ภายใต้เงื่อนไขบางประการสามารถใช้ไอออนบวก - การแลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี ตัวอย่างเช่นกรด polyhydroxy บางตัวสามารถมีอยู่ในรูปแบบไอออนิกในการแก้ปัญหา เฟสที่อยู่กับที่มีกลุ่มที่มีประจุลบและไพเพอร์โพลีไฮดรอกซีที่มีประจุบวกจะถูกดึงดูดไปยังระยะนิ่ง การแยกขึ้นอยู่กับความแตกต่างของความหนาแน่นของประจุและขนาดของไพเพอร์

ไอออน - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟี

ในทางกลับกันหากสารประกอบ polyhydroxy สามารถสร้างแอนไอออนไอออน - Exchange Chromatography ใช้ได้ ตัวอย่างเช่นฟอสเฟตน้ำตาลบางชนิดมีประจุลบในสารละลาย เฟสคงที่มีกลุ่มที่มีประจุบวกและแอนไอออนจะถูกเก็บไว้ในคอลัมน์ การแยกขึ้นอยู่กับความแข็งแรงของการปฏิสัมพันธ์ระหว่างแอนไอออนและเฟสคงที่

ขนาด - การยกเว้นโครมาโตกราฟี (วินาที)

ขนาด - การยกเว้นโครมาโตกราฟีหรือที่เรียกว่าเจล - การกรองโครมาโตกราฟีแยกโมเลกุลตามขนาดและรูปร่างของพวกเขา เฟสคงที่ประกอบด้วยลูกปัดที่มีรูพรุนที่มีการกระจายขนาดรูขุมขนที่กำหนดไว้

เมื่อตัวอย่างที่มีสารประกอบ polyhydroxy ถูกส่งผ่านคอลัมน์โมเลกุลขนาดเล็กสามารถเข้าสู่รูขุมขนของลูกปัดและมีเส้นทางที่ยาวขึ้นผ่านคอลัมน์ในขณะที่โมเลกุลขนาดใหญ่จะถูกแยกออกจากรูขุมขน วิธีนี้มีประโยชน์สำหรับการแยกสารประกอบ polyhydroxy ตามน้ำหนักโมเลกุลโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับโพลีเมอร์หรือ oligomers ของสารประกอบ polyhydroxy

โครมาโตกราฟี Affinity

Affinity Chromatography ใช้ประโยชน์จากการมีปฏิสัมพันธ์ที่เฉพาะเจาะจงระหว่างแกนด์ที่ตรึงอยู่ในเฟสคงที่และสารประกอบ polyhydroxy เป้าหมาย ตัวอย่างเช่นหากสารประกอบ polyhydroxy มีไซต์ที่มีผลผูกพันเฉพาะสำหรับโปรตีนหรือเอนไซม์เฉพาะโปรตีนหรือเอนไซม์ที่สอดคล้องกันสามารถตรึงในเฟสคงที่

สารประกอบ polyhydroxy จะผูกกับแกนด์โดยเฉพาะในเฟสคงที่ในขณะที่ส่วนประกอบอื่น ๆ ในตัวอย่างจะผ่านคอลัมน์ จากนั้นโดยการเปลี่ยนเงื่อนไขเช่นค่า pH หรือความแข็งแรงของไอออนิกของเฟสเคลื่อนที่สารประกอบ polyhydroxy ที่ถูกผูกไว้สามารถถูกชะออกจากคอลัมน์ วิธีนี้ให้การแยกการคัดเลือกสูงและมักจะใช้ในการทำให้บริสุทธิ์ของสารประกอบ polyhydroxy ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพ

การพิจารณาในทางปฏิบัติ

เมื่อเลือกวิธีโครมาโตกราฟีสำหรับการแยกสารประกอบ polyhydroxy ต้องพิจารณาปัจจัยหลายอย่าง ประการแรกธรรมชาติของสารประกอบ polyhydroxy เองรวมถึงน้ำหนักโมเลกุลขั้วประจุและเสถียรภาพ ประการที่สองเมทริกซ์ตัวอย่างซึ่งอาจมีสารอื่น ๆ ที่สามารถรบกวนการแยก ประการที่สามความไวที่ต้องการและความละเอียดของการวิเคราะห์

ตัวอย่างเช่นหากคุณมีตัวอย่างทางชีวภาพที่ซับซ้อนที่มีสารประกอบ polyhydroxy ที่หลากหลายและชีวโมเลกุลอื่น ๆ อาจจำเป็นต้องใช้วิธีการโครมาโตกราฟีที่แตกต่างกัน คุณอาจเริ่มต้นด้วยวิธีการแยกแบบกว้างเช่นขนาด - การแยกโครมาโตกราฟีเพื่อแยกส่วนตัวอย่างตามขนาดโมเลกุลจากนั้นใช้วิธีการเฉพาะเช่นไอออน - แลกเปลี่ยนโครมาโตกราฟีหรือโครมาโตกราฟี Affinity เพื่อการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป

บทสรุป

เป็นซัพพลายเออร์ของสารประกอบ polyhydroxyฉันรู้ว่าการมีวิธีการแยกที่เชื่อถือได้สำหรับสารประกอบเหล่านี้มีความสำคัญเพียงใด ไม่ว่าคุณจะเป็นนักวิจัยในห้องปฏิบัติการนักวิเคราะห์การควบคุมคุณภาพในโรงงานหรือผู้ที่เกี่ยวข้องในการผลิตผลิตภัณฑ์โดยใช้สารประกอบ polyhydroxy การทำความเข้าใจวิธีการโครมาโตกราฟีเหล่านี้สามารถช่วยให้คุณได้รับผลลัพธ์ที่แม่นยำและผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสูง

หากคุณสนใจในสารประกอบ polyhydroxyหรือต้องการข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการแยกและการวิเคราะห์อย่าลังเลที่จะเข้าถึง เรายินดีที่จะหารือเกี่ยวกับความต้องการของคุณและจัดหาโซลูชั่นที่ดีที่สุดเสมอ เรายังเสนอผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องเช่นอนุพันธ์ thiophene ที่มีความไวสูงและอนุพันธ์ Anthraquinoneสำหรับแอปพลิเคชันต่างๆ ติดต่อเราเพื่อเริ่มการอภิปรายการจัดซื้อและค้นหาผลิตภัณฑ์ที่เหมาะสมสำหรับโครงการของคุณ!

การอ้างอิง

• Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Glajch, JL (2010) การพัฒนาวิธีการ HPLC ในทางปฏิบัติ John Wiley & Sons
• McMaster, MC (2008) แก๊สโครมาโตกราฟีและแมสสเปกโตรเมตรี: คู่มือปฏิบัติ John Wiley & Sons
• Scopes, RK (1994) การทำให้บริสุทธิ์โปรตีน: หลักการและการปฏิบัติ สปริงเกอร์